Иван Охлобыстин родился 22 июля 1966 года в селе Поленово, Тульская область. Мальчик вырос в доме отдыха «Поленово», где в то время работал главным врачом его отец. В детстве жил под Малоярославцем, затем семья переехала в Москву. После окончания школы поступил во Всероссийский Государственный Институт Кинематографии, в мастерскую Игоря Таланкина.
Получив диплом вуза в 1992 году дебютировал в качестве актера в фильме «Нога» режиссера Никиты Тягунова, за которую получил приз на фестивале «Молодость» за лучшую роль. Первый же его сценарий номинировался на престижную премию «Зеленое яблоко, золотой листок».
Первая полнометражная режиссерская работа Охлобыстина «Арбитр» с саундтреком групп «Пикник» и «Оберманекен» получила награду «Кинотавр» в категории «Фильмы для избранных». В качестве сценариста Иван сотрудничал с Московским Художественным Академическим Театром. По его сценарию сняты культовый фильм «ДМБ», комедия «Даун Хаус», картины «Параграф 78», «Дом Солнца». Еще написал сценарии и снял несколько фильмов из серии «Жития святых».
Помимо многочисленных сценарных работ в начале 2000-х годов Охлобыстин опубликовал свою книгу в жанре фантастики «XIV принцип». Параллельно вел колонку в мультимедийном сообществе «Сноб» и работал ведущим на радиостанции.
Кроме того, в 2001 году Охлобыстин рукоположен в священники в Ташкентской епархии по именем Иоанн. Однако в связи со здоровьем жены вынужден вернуться в Москву. До 2005 года служил в храме святителя Николая в Заяицком, расположенном на Раушской набережной Москвы-реки, а затем в храме Софии Премудрости Божией на Софийской набережной. В том же году, в связи с финансовыми сложностями снова вернулся в кинематограф. Через четыре года по его собственной просьбе патриарх Кирилл временно запретил его для служения. При этом сам Иван не исключает мысль о том, чтобы вновь вернуться к священству.
Начиная с 2005 года, после длительного перерыва снова начал активно сниматься в кино. В фильме «Заговор» режиссера Станислава Либина исполнил роль Григория Распутина. Через четыре года вышли сразу несколько фильмов с его участием. Наиболее известны боевик «Пуля-дура» и историческая драма «Царь», где Охлобыстин сыграл царского шута Вассиана.
Широкой публике артист стал известен после начала работы в сериале «Интерны». Ему досталась главная роль: доктора Быкова. Работу над юмористическим сериалом Охлобыстин начал в 2010 году. Успех «Интернов» оказался невероятным. Зрители с нетерпением ждали продолжения. В данном проекте Иван снимался в течении шести лет.
Охлобыстин известен своей неординарной деятельностью в совершенно разных сферах. С 2010 года в течении четырех лет занимал должность креативного директора компании «Евросеть», а затем стал креативным директором компании «Baon».
В сентябре 2011 года на пресс-конференции в «Интерфаксе» заявил о готовности выдвинуть свою кандидатуру на пост Президента Российской Федерации в 2012 году, однако вскоре отказался от выдвижения. В апреле 2012 года объявил о создании партии «Коалиция «Небо».
В 2014 году Охлобыстин попал под санкции украинских чиновников, запретивших актеру приезжать в страну, а также появляться на украинском телевидении. Запреты коснулись не только его персоны, но и всей его фильмографии. В том же году включен в списки лиц, которым запрещен въезд на территорию Латвии и Эстонии.
В августе 2015 года Служба Безопасности Украины внесла Охлобыстина в список деятелей культуры, действия которых создают угрозу национальной безопасности Украины. В следующем 2016 году артист написал заявление на имя Главы Донецкой Народной Республики Александра Захарченко с просьбой о предоставлении гражданства ДНР. На следующий день просьбу удовлетворили. Паспорт Охлобыстину в Донецке вручил лично глава республики.
С апреля 2017 года является колумнистом русскоязычной версии сайта телеканала RT. С апреля 2018 года озвучивает Печкина в мультфильме «Возвращение в Простоквашино».
Иван Иванович состоит в общественной организации «Право на оружие» и является ее почетным членом. Артист не только борется за права гражданских владельцев оружия, у него у самого дома коллекция ружей.